1.1 摘要

背景：中風(fēng)是一個(gè)毀滅性的全球健康問題，死亡率和殘疾率很高。育齡男性中男性不育癥的患病率日益增加，已成為全世界日益關(guān)注的問題。然而，男性不育癥與中風(fēng)發(fā)病率之間的關(guān)系仍不確定。本研究旨在通過采用孟德爾隨機(jī)化（MR）方法來解決這一知識(shí)差距。

方法：利用來自男性不育癥和中風(fēng)的全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）的遺傳工具變量，實(shí)施了雙樣本MR設(shè)計(jì)。采用五種不同的分析方法，以逆方差加權(quán)為主要方法，檢查男性不育癥與各種卒中亞型之間的遺傳因果關(guān)系。通過異質(zhì)性分析、多效性檢驗(yàn)和留一法驗(yàn)證來評(píng)估異質(zhì)性，評(píng)估多效性，并確保研究結(jié)果的穩(wěn)健性。

結(jié)果：結(jié)果表明，與男性不育相關(guān)的小血管卒中風(fēng)險(xiǎn)可能較低（比值比，95% 置信區(qū)間：0.82,0.68-0.99，p=0.044），但未觀察到對(duì)其他卒中亞型的顯著影響。該研究表現(xiàn)出低異質(zhì)性，沒有明顯的多效性；然而，結(jié)果的穩(wěn)定性并不理想。

結(jié)論：男性不育癥可能會(huì)對(duì)小血管卒中風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)生保護(hù)作用。由于潛在的混雜因素，需要謹(jǐn)慎。需要更多的研究來證實(shí)這些發(fā)現(xiàn)并提供進(jìn)一步的驗(yàn)證。

1.2 男性不育癥的遺傳工具

經(jīng)過徹底的篩選過程，從FinnGen項(xiàng)目中共鑒定出24個(gè)與男性不育癥相關(guān)的SNP，并將其納入本研究。值得注意的是，所有這些SNP都表現(xiàn)出大于20的F統(tǒng)計(jì)量，表明排除了弱工具變量偏倚。

1.3 MR分析

采用IVW、MR-Egger、加權(quán)中位數(shù)、簡單模態(tài)和加權(quán)模態(tài)方法估計(jì)遺傳預(yù)測的男性不育癥與卒中風(fēng)險(xiǎn)之間的因果關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn)男性不育癥與中風(fēng)或缺血性中風(fēng)的總體發(fā)病率之間沒有因果關(guān)系。

在缺血性卒中亞型分析中，我們觀察到男性不育癥與大血管卒中（OR=0.94,95% CI=0.79-1.12，p=0.518）或心源性栓塞性卒中（OR=0.95,95% CI=0.82-1.09，p=0.424）之間沒有關(guān)聯(lián)。 然而，存在因果關(guān)系，表明與男性不育相關(guān)的小血管卒中風(fēng)險(xiǎn)降低（OR=0.82,95% CI=0.68-0.99，p=0.044，IVW 方法）。 使用MR-Egger，我們發(fā)現(xiàn)了心源性栓塞性卒中風(fēng)險(xiǎn)降低與男性不育癥之間因果關(guān)系的證據(jù)（OR=0.68,95%CI=0.50-0.91，p=0.018）。

1.4 敏感性分析

漏斗圖用于可視化每個(gè)SNP的單個(gè)Wald比率，根據(jù)其精度繪制，從而能夠通過觀察不對(duì)稱性來檢測潛在的方向水平多效性。當(dāng)使用 MR-Egger方法時(shí)，在心源性栓塞性卒中的漏斗圖中觀察到明顯的不對(duì)稱性。應(yīng)該注意的是，當(dāng)遺傳工具的數(shù)量有限時(shí)，評(píng)估漏斗圖的對(duì)稱性可能具有挑戰(zhàn)性。腦卒中亞型間異質(zhì)性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Q>0.05），表明本研究的異質(zhì)性較低。

MR-Egger分析的截距沒有提供總體卒中、缺血性卒中、大血管卒中或小血管卒中定向多效性的實(shí)質(zhì)性證據(jù)（分別為p=0.964、p=0.667、p=0.368和p=0.688; 附表S4）。然而，在心源性栓塞性卒中中觀察到定向多效性的顯著證據(jù) （p=0.023）。

為了確定可能使因果關(guān)系產(chǎn)生偏差的潛在影響SNP，我們使用IVW方法進(jìn)行了遺漏分析。我們發(fā)現(xiàn)，去除任何單個(gè)SNP對(duì)總體卒中、缺血性卒中、大血管卒中和心源性栓塞性卒中。

然而，在小血管卒中的情況下，去除幾個(gè) SNP，例如 rs3816838、rs73527055、rs10503673 等，可能會(huì)導(dǎo)致最終結(jié)果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。

2.1 遺傳工具變量

遺傳變量來自對(duì)不同人群進(jìn)行的大型公開全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）?；贔innGen R9數(shù)據(jù)集，我們選擇了與男性不育相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性（SNP）來創(chuàng)建我們的遺傳工具。FinnGen R9包含從300,000多名芬蘭人收集的基因組數(shù)據(jù)，使其成為同類中最大的遺傳數(shù)據(jù)庫之一。從FinnGen R9隊(duì)列中，我們納入了13,142名男性不育癥患者，而107,564名參與者被選為對(duì)照組。我們篩選了SNP，以確定那些與男性不育癥有密切關(guān)聯(lián)的SNP。該篩選涉及考慮全基因組顯著性水平p <5×10?6，確保分析中僅包含高度顯著的SNP。為確保SNPs在MR分析中的獨(dú)立性，采用連鎖不平衡聚集算法來識(shí)別彼此之間表現(xiàn)出最小相關(guān)性的SNP（r 2<0.001）。此外，F(xiàn)統(tǒng)計(jì)量用于評(píng)估弱儀器引起的潛在偏差。F統(tǒng)計(jì)量值大于10表示存在強(qiáng)遺傳工具變量。還進(jìn)行了分析，以評(píng)估遺傳儀器與各種類型中風(fēng)之間的相關(guān)性。

2.2中風(fēng)的數(shù)據(jù)來源

卒中的遺傳數(shù)據(jù)摘自國際卒中遺傳學(xué)聯(lián)盟發(fā)起的 MEGASTROKE 項(xiàng)目，該項(xiàng)目的全面描述可在以前的出版物中提供。除了整體卒中（所有卒中，AS）外，MEGASTROKE聯(lián)盟還將卒中分為四種亞型，即任何缺血性卒中（AIS）、大動(dòng)脈卒中（LAS）、心源性栓塞性卒中（CES）和小血管卒中（SVS）。這項(xiàng)研究包括67,162例中風(fēng)病例和454,450例對(duì)照。在AS病例中，60,341例被歸類為AIS，6,688例被歸類為LAS，9,006例被歸類為CES，11,710例被歸類為SVS。

2.3 統(tǒng)計(jì)分析

首先，單核苷酸多態(tài)性（SNP）與暴露因子密切相關(guān)，選取單核苷酸多態(tài)性作為工具變量，濾波MR 研究中的主要分析涉及 IVW 回歸分析，假設(shè)沒有無效的遺傳工具。本研究還利用了其他四種MR分析方法，即MR-Egger、加權(quán)中位數(shù)、簡單模和加權(quán)模。在 MR 中，通常使用IVW方法，通過根據(jù)多個(gè)遺傳變異的逆方差對(duì)它們進(jìn)行加權(quán)來組合來自多個(gè)遺傳變異的因果估計(jì)值，假設(shè)儀器有效且沒有定向多效性。MR-Egger 回歸同時(shí)估計(jì)因果效應(yīng)和多效性偏倚，適應(yīng)違反無多效性假設(shè)的變異。加權(quán)中位數(shù)法采用單個(gè)因果估計(jì)值的中位數(shù)，即使使用無效工具或中等異質(zhì)性，也能提供來自有效工具的權(quán)重超過50%的一致估計(jì)值。簡單模式方法計(jì)算遺傳變異中最常見的因果估計(jì)值，有效且沒有異質(zhì)性或有偏差的因果估計(jì)值。加權(quán)模式方法將頻繁的因果估計(jì)與比例權(quán)重相結(jié)合，以解決異質(zhì)性問題。

結(jié)果以比值比（OR）和β值報(bào)告，從而深入了解卒中風(fēng)險(xiǎn)。OR值大于1表示暴露因子是結(jié)果的不利因素，而OR值小于1表示有利因素。同樣，β值小于0表示暴露因素是結(jié)果的危險(xiǎn)因素，而β值大于0表示有利因素。MR 分析使用 R 中的“TwoSampleMR”包（版本 4.21）進(jìn)行。使用 IVW和MR-Egger檢驗(yàn)評(píng)估異質(zhì)性，p值小于0.05表明研究中存在異質(zhì)性。我們還使用Cochrane的Q統(tǒng)計(jì)量來評(píng)估SNP特異性因果估計(jì)值之間的異質(zhì)性。進(jìn)行MR-Egger截距檢驗(yàn)以評(píng)估數(shù)據(jù)中多效性的存在并評(píng)估結(jié)果的穩(wěn)健性。小于0.05的p值表示數(shù)據(jù)中存在多效性。此外，對(duì)于敏感性分析，我們采用了留一法，系統(tǒng)地單獨(dú)去除每個(gè)SNP并重復(fù)IVW分析。這種方法使我們能夠評(píng)估每個(gè)SNP對(duì)觀察到的因果效應(yīng)的潛在影響。

根據(jù)《Front Endocrinol》上發(fā)表的一篇題為"Causal associations of male infertility with stroke: a two-sample Mendelian randomization study"的研究，通過孟德爾隨機(jī)化分析，發(fā)現(xiàn)男性不育癥可能會(huì)對(duì)小血管卒中風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)生保護(hù)作用。由于潛在的混雜因素，需要更多的研究來證實(shí)這些發(fā)現(xiàn)并提供進(jìn)一步的驗(yàn)證。

本文通過對(duì)已發(fā)表的孟德爾隨機(jī)化研究進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，發(fā)表二區(qū)文章，IF=5.2，影響因子也比較高，為我們提供了一種新的發(fā)文思路，趕快學(xué)起來吧！